Определение содержания антистрептолизина О (АСО) основано на взаимодействии АСО исследуемой пробы с молекулами стрептолизин-О (СО) человека, иммобилизованными на поверхности латексных частиц. При смешивании СО латекса с сывороткой крови, содержащей АСО в концентрации превы-шающей 200 МЕ/мл, в результате реакции между СО и АСО развивается визуально регистрируемая агглютинация латексных частиц, что свидетельствует о положительной реакции пробы .

Исследуемый материал :

Сыворотка крови. Использование гемолизированных и липемичных образцов недопустимо. Образцы, содержащие частицы фибрина, перед анализом необходимо отцентрифугировать. Срок хранения исследуемых образцов при температуре 2-8°С не более 2 суток.

Состав набора и условия хранения:

1. СО латекс
2. Буфер
3. Позитивный калибратор - концентрация АСО > 200 МЕ/мл
4. Пограничный калибратор - концентрация АСО ~ 200 МЕ/мл
5. Негативный калибратор - концентрация АСО < 200 МЕ/мл
6. Тест-пластина и шпатели.

Реагенты стабильны при температуре хранения 2-8°С в течение 18 месяцев. Дата изготовления, срок годности, серия и номер по каталогу указаны на упаковке набора.

Подготовка реагентов к процедуре анализа:

Оптимальная температура реагентов и окружающей среды при проведении анализа 22-25°С. При температуре ниже 18°С возможно получение ложных результатов.

СО-латекс перед использованием следует перемешать осторожным встряхиванием.

Анализ:

I. Качественное определение:

Поместить в индивидуальные лунки тест-пластины калибраторы и исследуемые образцы сыворотки в объеме 20 мкл. Внутрь каждой лунки добавить по 20 мкл СО латекса. Быстро перемешать содержимое капель исследуемого образца и СО латекса в каждой лунке индивидуальным шпателем до гомогенного состояния.

Перемешивать реакционную смесь круговыми движениями тест-пластины на механической орбитальной мешалке или вручную со скоростью 80-100 об/мин в течение 2 минут. Процесс агглютинации следует регистрировать в течение 1 минуты после окончания движения тест-пластины. Существенное увеличение временного промежутка между остановкой тест-пластины и фиксацией результата может привести к регистрации ложной агглютинации, возникающей в процессе подсыхания реакционной смеси.

Интерпретация результатов:

1. Четко видимые агрегаты латексных частиц - концентрация АСО > 200 МЕ/мл.
2. Мелкие агрегаты - концентрация АСО ~ 200 МЕ/мл.
3. Равномерно-гомогенная молочная суспензия - концентрация АСО < 200 МЕ/мл.

II. Полуколичественное определение:

Приготовить разведения исследуемых проб с помощью буфера в соответствии с таблицей

Таблица

Провести анализ полученных разведений в соответствие с п. I.

Референтные пределы :

• до 200 МЕ/мл.

Специфичность:

Используемый в наборе реагентов СО антиген обладает высокой специфичностью по отношению к АСО человека и не проявляет перекрестных реакций с другими белками сыворотки в условиях тестирования.

ВНИМАНИЕ!

Не допускать замораживания набора при хранении, так как это приводит к утрате способности СО латекса к реакции агглютинации, а следовательно к получению ложно-отрицательных результатов.

Диагностическая информация :

Высокие титры АСО указывают на острую стрептококковую инфекцию, поэтому в этом случае тест необходимо повторить через неделю, чтобы выявить динамику заболевания. Повышенное содержание AСO в сыворотке крови характерно для пациентов, страдающих скарлатиной, острым ревматоидным артритом, тонзиллитом и другими стрептококковыми инфекциями, а также для клинически здоровых бактерионосителей.

Литература:

1. Plotz and Singer, Amer. J. Med., 1979, vol.22.

Внимание!

Для дезинфекции слайд-пластины следует использовать дезинфектанты на основе свободного хлора - такие, как "Хлорамикс", "ДП-2Т", "Жавель солид", «Хлорапин".

Недопустимо использование средств на основе перекиси водорода и фтора, в частности "Абсолюцид окси".

АСЛО прямой латексный экспресс тест (ASO Direct Latex)

Экспресс-тест для полуколичественного определения антистрептолизина О в сыворотке и плазме крови. Чувствительность >200 МЕ/мл. Контроли положительный и отрицательный, подложка, мешалки. Время анализа не более 3 мин.

Антистрептолизин «О» (АСЛО) антитела вырабатываются организмом при инфицировании бета-гемолитическими стрептококками в ответ на высвобождающийся из бактерий стрептолизин «О». Обнаружение и количественная оценка АСЛО в сыворотке позволяет определить сам факт и степень инфицирования.

Предназначение и принцип метода

АСЛО латексный реагент является суспензией латексных частиц, сенсибилизированных стрептолизином «О». При смешивании реагента с образцом сыворотки, содержащим АСЛО-антитела, происходит реакция агглютинации, которая легко регистрируется визуально.

Состав

• Латексный реагент, 5 мл (Латексные частицы, сенсибилизированные стрептолизином О, реагент содержит азид натрия 0,095%)
• Позитивный контроль, 0,5 мл (Сыворотка крови человека, позитивная по АСЛО-антителам (>200 МЕ/мл), реагент содержит азид натрия 0,095%)
• Негативный контроль, 0,5 мл (Сыворотка крови человека, негативная по АСЛО-антителам (<200 МЕ/мл), реагент содержит азид натрия 0,095%)
• Стеклянная подложка
• Одноразовые мешалки
• Инструкция

Исследуемые пробы

АСО латекс-тест № 1 250 определений(11,02)

ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов «АСО ЛАТЕКС-ТЕСТ»

Набор реагентов для определения

антистрептолизина-О в реакции агглютинации латекса

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Для качественного и количественного определения антистрептолизина-О (АСО) в сыворотке крови человека. Может применяться при диагностике и контроле терапии ревматической лихорадки, острого ревматоидного артрита, гломерулонефрита и других заболеваний, вызванных ß-гемолитическими стрептококками группы А, С и G.

1. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

2.1. Принцип действия

Иммунологическое взаимодействие АСО со стрептолизином-О, находящимся на поверхности латексных частиц. Результатом взаимодействия является агглютинация латекса с образованием мелких или крупных зерен, различимых визуально.

2.2. Состав набора

АСО-латексный реагент – суспензия частиц полистирольного латекса с нанесенным на них стрептолизином-О; суспензия белого цвета, при хранении разделяется на осадок белого цвета, легко разбивающийся при встряхивании, и бесцветную прозрачную или слегка опалесцирующую надосадочную жидкость.

Чувствительность АСО-латексного реагента откалибрована относительно международного стандарта (ВОЗ).

Физиологический раствор (ФР) – 0,9 % раствор натрия хлорида; содержит консервант — азид натрия в конечной концентрации 0,1 %; прозрачная бесцветная жидкость

Положительная контрольная сыворотка (К +) — жидкая сыворотка крови человека, инактивированная прогреванием при 56° С в течении 1 ч, содержащая АСО в концентрации более 200 МЕ/мл, дающая отрицательную реакцию на HBsAg и не содержащая антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2 и ВГС; содержит консервант – азид натрия в конечной концентрации 0,1 %; прозрачная бесцветная или от желтоватого до красно-коричневого цвета жидкость.

Отрицательная контрольная сыворотка (К –) — жидкая сыворотка крови человека, инактивированная прогреванием при 56° С в течении 1 ч, содержащая АСО в концентрации менее 150 МЕ/мл, дающая отрицательную реакцию на HBsAg и не содержащая антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2 и ВГС, содержит консервант – азид натрия в конечной концентрации 0,1 %; прозрачная бесцветная или желтоватого цвета жидкость.

1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

НАБОРА

Набор рассчитан на проведение 250 определений, включая контрольные образцы.

1. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).

1. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

— Шейкер орбитальный (любой марки с амплитудой колебаний 10-20 мм).

— Градуированные пипетки 2 класса точности или дозаторы пипеточные.

— Микропипетки автоматические или пипетки-мешалки (на 20 мкл).

— Палочки стеклянные или пластиковые.

— Часы или таймер.

1. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Используется свежеполученная сыворотка крови. Использование в качестве образцов плазмы крови не допускается. Забор крови должен быть произведен согласно стандартной процедуре. Допускается хранение образцов 7 дней при 2-8 ˚С или 3 месяца при температуре минус 20 ˚С. Не подвергать образцы повторному замораживанию и оттаиванию.

Исследуемая сыворотка должна быть прозрачной и не содержать взвешенных частиц.

Не использовать гемолизированные или загрязненные образцы.

1. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1. Подготовка исследуемых образцов

Перед применением все компоненты набора выдержать не менее 15 минут при комнатной температуре.

7.2. Проведение анализа

Качественное определение

Нанести на карточку для постановки реакций (первую ячейку карточки) 20 мкл К + , рядом, с интервалом 2-3 см (на соседнюю ячейку) – 20 мкл К – . На оставшиеся ячейки нанести по 20 мкл исследуемых образцов.

Легким встряхиванием флакона перемешать АСО-латексный реагент и внести по 20 мкл его в каждую ячейку с образцом. Плоским концом пипетки-мешалки (стеклянной палочкой) тщательно перемешать каждую каплю (распределить реакционную смесь по всей площади ячейки). Для каждой капли использовать новую пипетку-мешалку (стеклянную палочку).

Покачивать карточку в течение 2 минут, после чего сразу произвести учет результатов реакции.

Определение титра

В пробирках или лунках планшета развести исследуемую сыворотку физиологическим раствором 9 г/л в соотношениях (1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 и 1:8), для чего к 10 мкл сыворотки добавить 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 и 80 мкл физиологического раствора, соответственно. При необходимости число разведений можно увеличить.

Нанести по 20 мкл каждого разведения в соответствующие ячейки карточки.

Легким встряхиванием флакона перемешать АСО-латексный реагент и добавить по 20 мкл в каждую ячейку с разведением, после чего перемешать каждую каплю, как указано выше для качественного определения.

Покачивать карточку в течение 2 минут, после чего произвести учет результатов реакции.

При более позднем учете могут быть получены искаженные результаты за счет неспецифической агглютинации частиц.

1. РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учет результатов проводить визуально.

Положительной РАЛ считается любое проявление агглютинации латекса (любая степень зернистости или различимых частиц в прозрачной или мутной жидкости в ячейке).

Отрицательной РАЛ считается отсутствие признаков агглютинации латекса (жидкость в ячейке остается мутной и однородной). Результаты РАЛ с исследуемыми сыворотками учитывать только при положительной реакции с К + и отрицательной реакцией с К – .

Качественное определение

Образцы, давшие положительную РАЛ, подлежат дополнительному исследованию (титрованию) для определения концентрации АСО.

Количественное определение

По результатам титрования определить титр АСО – максимальное разведение, в котором получена положительная РАЛ.

Концентрация АСО (МЕ/мл)=200 МЕ/мл×(величина, обратная титру АСО)

где 200 МЕ/мл — минимальная концентрация АСО, определяемая в РАЛ;

Пример:

Максимальное разведение = 1:8; титр АСО = 1:8;

концентрация АСО = 200´8 = 1600 МЕ/мл.

Положительная реакция указывает на острую стрептококковую инфекцию, поэтому в этом случае тест необходимо повторить через неделю, чтобы выявить динамику заболевания.

Повышенное содержание АСО характерно для пациентов, страдающих скарлатиной, острым ревматоидным артритом, ревматической лихорадкой, гломерулонефритом, тонзиллитом и другими стрептококковыми инфекциями, а также для клинически здоровых бактерионосителей.

Если концентрация АСО в пробе более 1500 МЕ/мл может наблюдаться эффект прозоны.

Ложноположительные результаты могут наблюдаться в случае ревматоидного артрита, тонзиллита и у некоторых здоровых бактерионосителей.

АНТИСТРЕПТОЛИЗИН О (АСЛО)

УПАКОВКА

E40062 40 тестов Полный набор

E40060 100 тестов АСЛО латекс реагент

E40063 100 тестов Полный набор

E40037 100 мл Буфер глицин NaCl

ПРИНЦИП МЕТОДА

Латексный тест на слайде для качественного и полуколичественного определения антистрептолизина О в неразведенной сыворотке.

МЕТОД

Набор АСЛО латекс тест содержит полистироловые латексные частицы, покрытые стабилизированным стерптолизином О в качестве антигена который иммунологически вступает в реакцию соответствующими антителами анти-стрептолизина О (АСЛО) образца пациента или контрольной сыворотки.

Положительная реакция определяется визуально по агглютинации латексных частиц в ячейках теста на слайде.

РЕАГЕНТЫ

40 или 100 тестов АСЛО латекс реагент

Суспензия полистирольных латексных частиц, покрытая стабилизированным стрептолизином О 1.0 %

0.5 мл или 1.0 мл Положительный контроль

Готовая к использованию человеческая сыворотка, содержащая концентрацию АСЛО необходимую для проведения агглютинации

0.5 мл или 1.0 мл Отрицательный контроль

Готовый к использованию контроль, не вступающий в реакцию с латексным реагентом

Слайд на 6 ячеек

Буфер глицин- NaCl 100 мл pH 8.2 ± 0.2

Глицин 100 ммоль/л

СТАБИЛЬНОСТЬ

Латексный реагент , положительный контроль и отрицательный контроль стабильны до указанной срока годности при 2-8°C.

Не замораживать!

Повреждение реагентов: Наличие частиц и мутность.

ОБРАЗЕЦ

Сыворотка

Стабильность: до 7 дней при 2-8°C,

До 3 месяцев при -20°C.

Не использовать высоко гемолизированные или липемические образцы.

СХЕМА РАСКАПЫВАНИЯ

Качественное определение (скрининг тест)

Поместите латексный реагент , положительный контроль , отрицательный контроль и образцы сыворотки в место при комнатной температуре. Тщательно перемешайте латексные частицы.
Раскапайте по капле на отдельные ячейки на слайде:
Положительный контроль
Отрицательный контроль
Латексный реагент во все образцы и контрольные ячейки	1 капля каждая ячейка
Перемешайте разными палочками и распределите жидкость по всей поверхности на определенных ячейках.
Поворачивайте слайд в течение 2 минут так чтобы смесь медленно перемещалась внутри ячеек на слайде или разместите на автоматическом ротаторе при 100 об./мин.
Через 2 минуты прочтите результаты при ярком искусственном освещении.

(1 капля  40мкл)

ТОЛКОВАНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Агглютинация указывает на то, что АСЛО содержит более чем 200 МЕ/мл в неразведенном образце. Сыворотка с положительными результатами на скрининг тесте должна быть протестирована снова при помощи титрирования. (см. часть 2)

Полуколичественный тест

Разбавленные образцы буфером глицин-NaCl, (код E40037):

Разведение	АСЛО(МЕ/мл в неразбавленном образце)
1 + 1 (1: 2) 1 + 2 (1: 3) 1 + 3 (1: 4) 1 + 4 (1: 5)	400 600 800 1000
Продолжите тест как описано в части 1.

ТОЛКОВАНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Прочтите титр на заключительном этапе разведения с агглютинацией и умножьте титр на фактор 200 (см"Чувствительность") для получения результатов в МЕ/мл; например: титр 1: 5  концентрация АСЛО

5 x 200 [МЕ/мл] = 1000 [МЕ/мл]

КАЛИБРОВКА

Чувствительность АСЛО латекса калибруется против международного калибратора АСЛО (ВОЗ).

НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ

Взрослые: до 200 МЕ/мл; Дети

Каждая лаборатория устанавливает собственные нормальные значения.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Положительный и отрицательный контроли используются с каждой серией. Их результаты должны сравниваться с результатами неизвестных образцов для определения различий между возможной грануляцией и агглютинацией.

Положительный контроль – определяет агглютинация за 2 минуты.

Отрицательный контроль – равномерная суспензия без агглютинации через 2 минуты.

РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Аналитическая чувствительность: -200 (±50 МЕ/мл)

Диагностическая чувствительность: 98%

Диагностическая специфика: 97%

Эффект «прозоны»: не наблюдался до 1500 МЕ/мл

Интерференция: Не наблюдалась с гемоглобином до 10г/л, билирубином до 20 мг/дл, липемией до 10г/л и ревматоидным фактором RF до 300МЕ/мл. Другие вещества могут интерферировать.

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Увеличение АСЛО титр может быть связано с ревматизмом и гломерулонефритом. Увеличенный АСЛО титр на более чем 200 МЕ/мл указывает на острую стрептококковую инфекцию. Титр АСЛО должны быть подвергнуты контролю каждые 2 недели на протяжении 4-6 недель.

ПРМИЕЧАНИЕ

Только для профессионального использования.

Для использования только в пробирке

Латексный реагент , положительный контроль , отрицательный контроль and буфер глицин-NaCl содержат 0.095% азида натрия. Не глотать. Избегать попадания на кожу и слизистую оболочку.

Утилизация использованных реагентов проводиться в соответствии с

положениями местного законодательства.

Все реагенты человеческого происхождения были протестированы методами, одобренными Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США на наличие поверхностного антигена гепатита В и ВИЧ, результат оказался отрицательным. Не смотря на отрицательный результат, считается, что все реагенты могут потенциально вызывать инфекции.

Из-за эффекта высыхания может появиться неправильный положительный результат по истечению 2 минут

Как и все диагностические методы, окончательная диагностика не может быть проведена используя результат единичного теста, она должна основываться на соотношении более чем результат одного теста с другими клиническими результатами.

tel. (48 58) 556 52 46

(48 58) 556 52 31

fax (48 58) 341 12 49

80-298 Gdansk POLAND